Микрореакция преципитации (МР) на сифилис
Rapid Plasma Reagin (RPR)

Что такое микрореакция преципитации

Микрореакция преципитации является нетрепонемным тестом,основанным на иммунологической реакции антиген-антитело.Реакция определяет в крови так называемые реагиновые антитела,которые организм вырабатывает против липидов поврежденных бледной трепонемой клеток организма и ,возможно, липопротеинов мембраны спирохет.Антилипидные антитела могут вырабатываться при многих заболеваниях и состояниях организма,сопровождающихся разрушением тканей,поэтому микрореакция преципитации является не подтверждающим сифилис тестом,а отборочным.
Микрореакцией тест назван в связи с тем,что для исследования необходимо незначительное количество исследуемого материала и реагентов,а преципитацией (от лат. Precepitacio — падение) в связи с тем,что обрузующийся в результате реакции антиген-антител комплекс выпадает в осадок (преципитация) с образованием хлопьев (флоккуляция).

1. Микроскопический тест — оценка результатов реакции с использованием световой микроскопии для подсчета преципитантов — VDRL ( (по названию лаборатории-разработчика – Venereal Diseases Research Laboratory) — реакция с инактивированной сывороткой крови. При подозрении на нейросифилис при помощи VDRL исследуют спинномозговую жидкость.

2. Макроскопический тест — оценка результатов реакции невооруженным глазом -тест быстрых плазменных реагинов (Rapid Plasma Reagins, RPR),применяется в России под названиями реакция преципитации (РПР) с кардиолипиновым антигеном,отборочная реакция на сифилис (ОРС),микрореакция преципитации (МР),экспресс-диагностика сифилиса (ЭДС). Для подсчета применяют так называемые визуализирующие агенты,вовлекающиеся в комплекс антиген-антитело (чаще частицы угля и частицы толуидинового красного).

Количественная микрореакция преципитации
Проводится методом серийного разведения исследуемой сыворотки крови.Титром преципитинов считают последнее разведение плазмы или сыворотки крови,где обнаружен преципитат.

Когда применяется микрореакция преципитации

Скрининг на сифилис
Массовое обследование определенных групп населения.Для скрининга применяются дешевые,простые и быстрые по исполнению тест системы,основанные на микрореакции преципитации.Скринингу на сифилис подвергаются:

• Беременные женщины
• Доноры крови и органов для трансплантации
• Некоторые профессиональные контингенты (работники питания,образования,здравоохранения)
• Военнослужащие
• Лица,отбывающие наказание в местах лишения свободы
• Больные,готовящиеся к оперативному хирургическому вмешательству
• Лица,поступившие на стационарное лечение (обязательная вассерманизация — в России,странах СНГ и некоторых других странах)

Диагностика сифилиса
Для диагностики сифилиса применяются комбинация количественной модификации микрореакции преципитации и трепонемных тестов на сифилис.Серологическое обследование на сифилис назначается в следущих случаях:

• Лицам,имеющих клинические признаки сифилиса
• Лицам с любыми генитальными язвами
• Лицам — половым партнерам больных сифилисом,а также в случае близкого бытового контакта с больным вторичным сифилисом
• Детям,родившимся от больных сифилисом матерей
• Лицам с подтвержденным диагнозом других половых инфекций
• Для подтверждения результатов скрининга (отборочных реакций)

Контроль за лечением сифилиса
Так как к моменту снятия с учета леченного больного сифилисом микрореакция преципитации с кардиолипиновым антигеном обычно негативируется, а позитивные специфические реакции (РИТ, РИФ, ИФА, РПГА.) могут наблюдаться долго после окончания лечения (поэтому эти тесты не могут служить критерием излеченности) микрореакция преципитации является основным тестом для установления критерия излеченности сифилиса.

Снижение титров нетрепонемных тестов в 4 и более раза в течении года после лечения подверждает эффективность проведенной терапии сифилиса и является критерием его излеченности( Приказ Минздрава РФ № 87 от 26.03.01 г,МЗ РФ Приказ от 25 июля 2003 г. N 327,Рекомендации CDC (USA) 2006)

Применяется количественная модификация микрореакции преципитации.Величина титра указывает на активность процесса, а его снижение во время лечения — на эффективность терапии. Стабильность титров должна настораживать в отношении эффективности терапии, увеличение их требует пересмотра лечения.

Как проводится микрореакция преципитации

Материал для исследования: кровь из пальца,венозная кровь,спинномозговая жидкость.Взятие крови желательно производить натощак.

Схема микрореакции преципитации
Для проведения реакции используется классический VDRL-антиген (кардиолипин+лецитин+холестерин) с добавлением частиц угля для визуальной оценки результатов.теста.Исследуемая сыворотка крови перемешивается на стекле с антигеном.Если в сыворотке содержатся реагиновые антитела то образуются чёрные хлопья (флоккулянты), являющиеся признаком положительной реакции. При отсутствии реагиновых антител в сыворотке образования хлопьев (флоккуляции) не происходит.

Результаты микрореакции на сифилис
При обнаружении антилипидных антител — положительная реакция (при проведении количественной модификации титры от 1: 2 до 1: 320 и выше
При отсутствии антилипидных антител — отрицательная реакция
При низких титрах антител — сомнительная реакция

Как оценивается микрореакция преципитации

Микрореакция становиться положительной в среднем через 4-5 недель после инфицирования.По мере развития сифилитической инфекции титры ее нарастают,при скрытом и позднем сифилисе количество антител уменьшается и микрореакция может быть оценена как слабоположительная или сомнительня,а иногда при третичном сифилисе и отрицательная.

	Сифилис (первичный серопозитивный,вторичный, третичный,скрытый) Леченый сифилис (у 10% перенесших сифилис негативация не наступает в течении всей жизни) Серорезистентность после лечения сифилиса Ложноположительная реакция
Сифилиса нет Первичный серонегативный сифилис Ложноотрицательная реакция Нельзя исключить поздний сифилис

Наиболее часто в мировой венерологии,а последнее время и в России результаты микрореакции оценивает совместно с трепонемными тестами РИФ и РПГА

Источник

Сифилис RPR (антикардиолипиновый тест / микрореакция преципитации), титр

Тест выявляет антитела против кардиолипина (липида, который входит в состав мембраны митохондрий и бактерий). Эти антитела присутствуют в крови у больных сифилисом.

Неспецифический антифосфолипидный (реагиновый) тест, современный аналог реакции Вассермана (RW).

Nontreponemal test, rapid plasma reagin test, syphilis screening test, STS.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Возбудителем сифилиса является Treponema pallidum (бледная трепонема), бактерия из семейства спирохет.

Сифилис – венерическое заболевание: наиболее часто он передается половым путем. Кроме того, возможно заражение через кровь (например, при совместном использовании шприцев, бритв и пр.), плода от матери или бытовым путем (очень редко).

В международной классификации болезней выделяют врождённый, ранний и поздний сифилис, а также неуточненные формы. В медицинской литературе используются понятия первичный, вторичный и третичный сифилис.

Инкубационный период начинается с момента заражения и длится до первых симптомов (твердого шанкра) в среднем 21 день (от 10 до 90 дней).

Первичный сифилис – стадия с возникновения твердого шанкра до появления сыпи. Твердый шанкр – это язвочка, которая может появляться в том месте, где возбудитель проник в организм (обычно на половых органах). Он не болит и исчезает (без лечения) через 2-6 недель. Также на этой же стадии иногда увеличиваются лимфоузлы. В первое время заболевший человек остается серонегативным (т. е. в его крови еще нет антител против сифилиса).

Вторичный сифилис. Примерно через 4-8 недель после появления шанкра проявляются новые симптомы: сыпь и общее недомогание, температура, головная боль и др. Возможны и более тяжелые проявления.

Затем признаки сифилиса исчезают и заболевание переходит в латентную фазу. При этом возбудитель все же не покидает организм, поэтому при ослаблении иммунитета могут возникать рецидивы болезни. Их симптомы совпадают с проявлениями вторичного сифилиса.

Бывает, что сифилис так и остается в латентной форме. Но в ряде случаев, если человек не лечится, с годами развивается третичный сифилис. При этом поражаются различные органы и ткани: нервная и сердечно-сосудистая система, кости, суставы и др.

Для диагностики сифилиса часто используют серологические тесты (основанные на выявлении антител). Все виды анализов можно разделить на две группы: трепонемные и нетрепонемные тесты. Анализ на сифилис RPR относится к нетрепонемным.

Трепонемные тесты выявляют антитела, направленные конкретно против самих бактерий T. Pallidum, например сифилис РПГА (реакция пассивной гемагглютинации) или сифилис РИФ (реакция иммунофлуоресценции).

Посредством нетрепонемных тестов выявляют антитела против кардиолипина (липида, который входит в состав мембраны митохондрий и бактерий). Они появляются в организме человека со стадии первичного сифилиса (примерно через неделю после возникновения твердого шанкра). При нетрепонемных методах анализа на сифилис не различают тип антител (IgG, IgM или др.), а определяют суммарный ответ. К таким исследованиям относят микрореакции преципитации: RPR, VDRL и др.

При первичном и вторичном сифилисе чувствительность нетрепонемных тестов высокая (в случае RPR: 86 % при первичном, 100 % при вторичном), а чем выше чувствительность метода, тем больше вероятность, что тест выявит болезнь. Соответственно, если человек болен сифилисом, то результат теста со 100-процентной чувствительностью точно будет положительным.

Однако при использовании нетрепонемных тестов возможен и ложноположительный результат (выявление антител, несмотря на то что человек не болен сифилисом). Дело в том, что антитела против кардиолипина возникают не только при сифилисе, но и при некоторых других заболеваниях.

Поэтому при диагностике сифилиса нетрепонемный тест должен быть подтвержден с помощью более специфичного трепонемного.

У нетрепонемных тестов есть еще одна особенность. Антитела против кардиолипина появляются в острой фазе болезни. Поэтому, когда человек выздоравливает, их уровень снижается, так что по нему можно судить об успешности лечения.

Для чего используется исследование?

• Для первичной диагностики сифилиса.
• Чтобы оценить успешность лечения.

Когда назначается исследование?

• При скрининговом обследовании на сифилис. Обследоваться должны беременные женщины, доноры крови (и органов), представители некоторых профессий (врачи, работники сферы питания, люди, контактирующие с детьми, пациенты перед госпитализацией или хирургической операцией.
• При подозрении на сифилис (если у пациента есть симптомы сифилиса, генитальные язвы или другие половые инфекции, а также если его половой партнер болен сифилисом). В частности, когда ребенок родился от матери, больной сифилисом.
• После прохождения курса лечения от сифилиса.

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

• Сифилиса нет. Однако нельзя полностью исключить и другие варианты.

• • Сифилис на ранней стадии. Если с момента заражения прошло меньше 3-5 недель, то антитела против кардиолипина еще не детектируются. Тест следует повторить через 10-14 дней.
  • Сифилис на поздней стадии. После стадии вторичного сифилиса количество кардиолипиновых антител снижается. Например, чувствительность метода VDLR при третичном сифилисе составляет 70 % (т. е. у 30 % больных результат будет отрицательным).
  • Ложноотрицательный результат (в редких случаях). Существует «эффект прозоны»: если антител очень много (слишком высокий титр), то результат может оказаться отрицательным.

Окончательное решение о постановке диагноза зависит от результата других тестов (трепонемных).

• Сифилис.
• Ложноположительный результат. В этом случае титр антител обычно очень низкий.

Положительный результат должен быть подтвержден с помощью специфических трепонемных тестов.

Что означают результаты теста, который сдают повторно (после курса лечения)?

• Если результат стал отрицательным или титр снизился в 4 раза и более – лечение прошло успешно.

• Если титр не снизился – нужна консультация с врачом и дальнейшие исследования.

Что может влиять на результат?

Ложноположительные результаты могут быть:

• при аутоиммунных расстройствах (например, при системной красной волчанке, тиреоидите),
• при лепре, ВИЧ-инфекции, атипичной пневмонии, малярии и др.,
• у людей, употребляющих наркотики внутривенно,
• у пожилых.

Кто назначает исследование?

Врач общей практики, терапевт, инфекционист, венеролог.

Источник

Виды анализа крови на микрореакцию: что это такое

Проводят его для окончательного выявления специфических при данном заболевании антител. Они представляют собой уникальные белки, которые синтезирует иммунная система. Выделить такие вещества можно лишь в случае образования в организме необходимых антигенов. В свою очередь, антигены представляют собой липидные вещества, образовавшиеся из клеточных мембран, которые ранее были разрушены возбудителем любой стадии сифилиса, а именно бледной трепонемой. Это хорошая и качественная методика. Она отличается особой простотой при проведении реакций, быстротой результата и дешевизной.

Основные виды анализа

Микрореакция относится скорее к неспецифическим видам анализов, то есть не направленным на выявление самого возбудителя. Дело в том, что она способна выявить даже самые мелкие повреждения клеточных мембран, которые и будут свидетельствовать о наличии трепонемы в организме.

Существует несколько основных видов реакции микропреципитации:

1. Тест с микроскопией позволяет выявить все липидные включения при помощи светового микроскопа без дополнительных веществ.
2. Тест с макроскопией еще можно назвать экспресс-диагностикой развивающегося сифилиса. Основывается метод на выявлении комплекса антиген-антитело. Результат можно получить без использования специальной аппаратуры. Чтобы увидеть реакцию к полученному комплексу, просто добавляют любое химическое вещество, которое, прочно соединяясь с данным комплексом, окрашивает его.
3. Тест с определенным количественным показателем. Этот тест проводится путем неоднократного разведения всего исследуемого материала, чтобы определить точное количество выявленных комплексов антиген-антитело в каждом случае.

Показания к проведению анализа

Такие исследования чаще всего проводят, чтобы выявить возбудителя сифилиса у большой группы населения. Основная цель такого анализа – это массовость, которая необходима для дальнейшей диагностики, если будет получен положительный результат.

Обычно анализ крови на микрореакцию назначается:

• в местах лишения свободы;
• при поступлении в стационар;
• беременным женщинам;
• перед оперативным вмешательством;
• военнослужащим;
• в период прохождения профилактических осмотров по месту работы;
• донорам крови.

Этот метод быстрой диагностики также широко применяют для окончательного контроля после лечения заболевания. Ведь именно реакция микропреципитации является одним из наиболее достоверных методов.

Методика проведения анализа и оценка результатов

Чтобы правильно провести такое исследование, сначала делают забор крови из пальца. Следующим анализом будет забор венозной крови из большой локтевой или другой крупной вены, который делается натощак. В случае если кровь из вены собрать невозможно, для анализа берут спинномозговую жидкость. Реакцию необходимо проводить на стерильном и обезжиренном сухом стекле. На него сразу помещается антиген, небольшая капля плазмы или сыворотка. После этого к заранее перемешанным первичным реагентам добавляют краситель. Чаще всего это могут быть небольшие кусочки угля. Обычно при проведении макроскопии всегда следят за изменением окраски препарата.

Результаты реакции могут быть следующими:

1. Положительная реакция. Если в препарате будут обнаружены антитела к липидным образованиям разрушенных ранее клеточных мембран, то появится специфический осадок с наличием в нем небольших хлопьев. Такой результат может свидетельствовать о наличии в организме какой-либо из форм сифилиса, а также о частичном сохранении основного титра заболевания у небольшой группы зараженных вирусом людей уже после лечения.
2. Отрицательная реакция говорит об отсутствии в крови специфических для заболевания иммунных белков. При этом никаких хлопьев в осадке обнаружено не будет. Это может означать, что сифилис не выявлен или находится уже на одной из поздних стадий. Может быть и такой вариант, когда обследование проводится на ранних этапах развития заболевания, когда антитела еще не успели образоваться или их общее количество очень мало. Такая реакция характеризуется незначительным, почти незаметным выпадением специфического осадка, что, в свою очередь, говорит о наличии малого количества антилипидных антител. В таких случаях назначают повторные анализы, советуют постоянное наблюдение у специалистов и проведение дополнительных методов обследования.

Обычно при проведении реакции микропреципитации обнаружить иммунные комплексы возможно лишь через месяц после заражения.

При развитии болезни количество антител будет только расти. Однако следует хорошо изучать все результаты проведенных исследований, поскольку на более поздних стадиях заболевания или при его скрытой форме основной титр антител может быть низким, поэтому реакция может оказаться отрицательной.

Ложные результаты анализа

Бывают случаи, когда анализ крови может показать недостоверные или ложные результаты. Такое может произойти, если была нарушена технология проведения теста. Ошибочный результат возможно получить при неправильном заборе исследуемого материала. Неправильное перемешивание ингредиентов, их загрязнение, нарушение технологии хранения – все это может привести к ошибочному результату.

Положительные ложные результаты также могут проявляться, например, при наличии в организме патологических состояний. Поэтому необходимо (до постановки окончательного диагноза) провести дополнительные исследования для выявления возможных патологий. Ложные положительные результаты могут быть при:

• беременности;
• наличии новообразований;
• сахарном диабете;
• вирусных заболеваниях печени;
• воспалении обоих легких или туберкулезе;
• при подагре;
• аутоиммунной и другой патологии любого генеза;
• алкоголизме и наркотической зависимости.

Таким образом, анализ крови на микрореакцию позволяет вовремя выявить заболевание и начать лечение.

Источник